Infection par le virus BK chez les receveurs de greffe de cellules souches hématopoïétiques: fréquence, facteurs de risque et association avec la cystite hémorragique post-greffe

Des échantillons de sang de receveurs de greffe de cellules souches hématopoïétiques consécutifs ont été obtenus et testés hebdomadairement pour l’ADN du virus BK par PCR quantitative en temps réel. Quarante-quatre patients ont développé une virémie BK à une médiane de plusieurs jours, – jours après la transplantation. survient après que la prise de plaquettes a eu des taux de virémie plus élevés que chez les patients sans médiane de la cystite hémorragique, × contre copies / mL; P = et les patients atteints de cystite hémorragique qui se sont produits avant la médiane plaquettaire plaquettaire, × contre copies / mL; La virémie P = BK était également fortement associée à une cystite hémorragique post-greffe dans une analyse dépendant du temps.

TGTCCT GGGCA-TAMRA, et PentonC-P TGGACAACAAGTCAACGG ATGTGGCA La concentration d’ADN plasmidique purifié a été mesurée par densité optique à nm DO et le nombre de copies d’ADN plasmidique a ensuite été calculé. Le nombre de copies connues de plasmides contenant l’ADN du virus BK a été linéarisé par digestion avec BamHI Une série de dilutions multipliées des plasmides digérés par BamHI qui contenaient l’ADN du virus BK a été utilisée comme courbe standard pour les dosages PCR en temps réel pour les produits BK du virus du sérotype adénoviral groupe C, groupe E, groupe B, groupe B, Le groupe A et le groupe F ont été clones en utilisant le kit de clonage Invitrogen TOPO TA. La concentration de chaque ADN plasmidique a été mesurée par DO et le nombre de copies a ensuite été calculé. Le nombre de copies connues de l’ADN plasmidique a ensuite été linéarisé par digestion HindIII. Une série de dilutions a été réalisée car le test PCR Adeno-AF détecte les plasmides du sérotype de l’adénovirus et du sérotype de l’adénovirus avec une efficacité égale, nous avons utilisé la série de dilution du plasma Comme le test PCR Adeno-BCE détecte les plasmides des sérotypes d’adénovirus, et avec une efficacité égale, nous avons utilisé la série de dilutions-pli de plasmide contenant Produit PCR issu du sérotype adénovirus comme standard pour le test PCR Adeno-BCE La méthode utilisée pour la PCR CMV et la PCR herpèsvirus humaine a été décrite ailleurs La cystite hémorragique a été classée selon les critères suivants: grade, hématurie microscopique; grade, hématurie macroscopique; grade, hématurie macroscopique avec des caillots; et grade, hématurie macroscopique qui nécessite une instrumentation pour l’évacuation des caillots et / ou qui provoque un dysfonctionnement rénal “La prise de plaquettes” a été définie comme un nombre de plaquettes de & gt; L’incidence de la virémie BK a été estimée en utilisant l’incidence cumulée. Les facteurs de risque de virémie BK et de cystite hémorragique ont été évalués en tant que variables dépendantes du temps en utilisant l’analyse de régression des risques proportionnels, tout comme BK. La virémie comme facteur de risque de cystite hémorragique L’analyse des facteurs de risque de la virémie BK a été réalisée pour toute virémie BK, ainsi que pour la virémie BK persistante, définie par des résultats positifs pour ⩾% des prélèvements plasmatiques chez les patients pour lesquels ⩾ Le test de Mann-Whitney U a été utilisé pour comparer les charges virales maximales des patients ayant eu une cystite hémorragique post-greffe avec les charges virales maximales des patients qui avaient cystite pré-hémorragique ou sans cystite hémorragique Toutes les valeurs de P sont basées sur les taux d’élasticité et la signification statistique sont évalués au niveau α des résultats des receveurs de HSCT,% ont reçu une greffe apparentée à HLA; % ont reçu une greffe apparentée non adaptée; % ont reçu une greffe non liée; et% ont reçu une transplantation autologue Chez les patients traités par cyclophosphamide, la prophylaxie contre la cystite hémorragique incluait une diurèse forcée et un traitement au mercaptoéthane-sulfonate de sodium Trente-quatre patients sont décédés en quelques jours après la transplantationHistoire hémorragique en% des receveurs une médiane de plusieurs jours, – jours après la transplantation En analyse univariée, la cystite hémorragique était associée à un manque de rapport de risque de prise de greffe plaquettaire; % CI, -; P = Seize patients% ont développé une cystite hémorragique avant la prise de plaquettes à une médiane de plusieurs jours, – jours après la transplantation Trois patients% ont développé une cystite hémorragique post-greffe, tous classés en grade, à une médiane de quelques jours, – jours après la transplantation Deux d’entre eux recevaient une forte dose de corticostéroïdes pour la maladie du greffon contre l’hôte au moment de la cystite hémorragique; le troisième patient a reçu une greffe autologue Un total de prélèvements plasmatiques de patients a été analysé pour le virus BK par PCR quantitative, avec une médiane d’échantillons, – des échantillons analysés par patient BK virus a été détecté dans les échantillons sanguins de% des patients, avec un médiane de la gamme des échantillons positifs consécutifs, – échantillons détectés par patient La virémie BK s’est produite à une médiane de quelques jours, – jours après la transplantation virémie prolongée qui a duré & gt; mois a eu lieu chez les patients%, et une virémie prolongée qui a duré & gt; mois atteint chez les patients% La valeur médiane de la charge virale maximale était de × copies / ml, × à × copies / mL. Le nombre de patients pour lesquels les résultats restaient positifs chaque semaine après l’obtention du premier résultat positif pour un échantillon. les résultats de l’analyse univariée des variables prétransplantation et posttransplantation pour toute apparition de la virémie BK et de la virémie persistante BK sont résumés dans le tableau

Figure Vue largeDownload slide Nombre absolu de patients pour lesquels les résultats de PCR pour le virus BK étaient positifs chaque semaine après l’obtention du résultat positif pour un échantillon B, La proportion de patients avec des échantillons positifs parmi les patients avec des échantillons N disponibles indique le nombre de patients testésFigure View largeTélécharger Diapositive Nombre absolu de patients pour lesquels les résultats de PCR pour le virus BK étaient positifs chaque semaine après l’obtention du résultat positif pour un échantillon B, La proportion de patients avec des échantillons positifs pour les patients avec des échantillons disponibles des patients testés

Évaluation des facteurs de risque de virémie BK chez les receveurs de greffe de cellules souches hématopoïétiquesDu patients atteints de cystite hémorragique préengengage, patient développé la virémie BK la veille de la cystite hémorragique Tous les patients avec postengraftment cystite hémorragique a reçu des résultats positifs de tests pour le virus BK dans le plasma à une médiane de jours, jours avant l’événement De ces patients, le patient avait une PCR réalisée pour la détection du virus BK dans les échantillons d’urine au moment de l’événement, et la Les résultats ont été positifs Les échantillons d’urine de tous les patients ont été testés pour l’adénovirus, et les résultats ont été négatifs. Une analyse en temps univarié a montré une forte association entre la virémie BK et la cystite post-greffe. × copies / mL; intervalle, × à × copies / mL étaient plus élevés que ceux chez les patients sans cystite hémorragique médiane, copies / mL; intervalle, à × copies / mL; P = et ceux chez les patients atteints de cystite hémorragique préengravement médiane, copies / mL; intervalle, à × copies / mL; P = Discussion La vaste étude longitudinale des patients a montré que% des patients avaient un virus BK quantifiable dans le plasma. Analyse univariée des facteurs de risque de survenue de la virémie BK ou de la virémie BK persistante identifiée séropositivité au CMV et la maladie sous-jacente comme seuls facteurs associée à la virémie BK Cependant, nous n’avons pas pu démontrer que la présence d’ADN du CMV dans le plasma ou l’antigénémie pp après transplantation était associée à la virémie BK; Par conséquent, la corrélation entre le sérotype CMV et la virémie BK n’a pas d’explication biologique évidente et nécessite une validation plus poussée. Contrairement aux résultats d’autres infections virales chez les receveurs de HSCT, les facteurs affectant l’immunité cellulaire, comme la lymphopénie, l’utilisation de corticostéroïdes. Cette découverte suggère qu’en plus de la déficience du système immunitaire, d’autres facteurs encore inconnus contribuent à la dissémination de l’infection par le virus BK. Dans leur étude, la virémie BK n’était pas systématiquement associée à une cystite hémorragique. La cystite hémorragique était associée à une faible numération plaquettaire; par conséquent, dans la présente étude, nous avons concentré notre analyse sur la cystite hémorragique post-greffe pour éviter le rôle potentiellement confondant de la thrombocytopénie dans l’apparition de la cystite hémorragique BK virémie était fortement corrélée avec la cystite hémorragique chez les patients avec prise de plaquettes soutenue; Bien que la différence dans les charges virales entre les patients avec cystite hémorragique post-greffon et les patients avec cystite hémorragique preengraftment ou les patients sans cystite hémorragique était très significative, la large gamme de charges virales Des études complémentaires sont nécessaires pour déterminer l’origine de la virémie BK Nous supposons que la réactivation du virus BK provient des voies urinaires, conduisant à une virémie BK secondaire. La présente étude a ses points forts et ses limites. Ses forces comprennent la grande taille de l’échantillon. , qui représente la plus grande cohorte à ce jour; la nature non sélectionnée et consécutive de la cohorte de patients; échantillonnage hebdomadaire; et l’utilisation d’un test quantitatif validé Ses limites incluent la détermination rétrospective de la cystite hémorragique; l’absence de détection du virus BK dans les échantillons d’urine obtenus chez certains patients; En conclusion, le virus BK est présent dans le sang d’un tiers des receveurs de HSCT dans les premiers jours après la transplantation. Une proportion substantielle de patients virémiques présentaient une virémie persistante. a duré des semaines Il existe une forte association statistique entre la virémie BK et la cystite post-greffe hémorragique Compte tenu du petit nombre de cas de cystite hémorragique post-greffe, une étude de cohorte plus importante ou une étude cas-témoin est nécessaire pour contrôler les facteurs de confusion possibles.

Remerciements

Nous remercions Chris Davis, Rachel Carter et Peter Choe, pour leurs services de base de données; Jim Reith, pour son aide à la rédaction; et Terry Stevens-Ayers, pour l’aide à l’analyse des données. Aide financière Fonds national suisse de la Fondation PBLAB-, Fonds de dotation Joel Meyers et National Institutes of Health octroie les conflits d’intérêts CA et CAPotential Tous les auteurs: no conflict